儲存型液氮罐在實(shí)驗(yàn)室生物實(shí)驗(yàn)中的使用規(guī)范

一、細(xì)胞培養(yǎng)中使用液氮罐的一般程序

     細(xì)胞培養(yǎng)的一般過程，主要包括準(zhǔn)備、取材、培養(yǎng)和凍存復(fù)蘇4步。為保存細(xì)胞，細(xì)胞株如果是不易突變的情況下一定要使用液氮深冷凍存。使用常規(guī)的液相液氮罐，一般實(shí)驗(yàn)室使用35升125口徑儲存型液氮罐，先將細(xì)胞處理，把含有保護(hù)劑的培養(yǎng)基加入凍存管內(nèi)，管內(nèi)放有需要凍存的細(xì)胞，利用程序降溫儀，或者使用冰箱梯度降溫，最后在液氮中長期保存。在-196度保存條件下，細(xì)胞保存的時間幾乎是無限的。

目前美國標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫或細(xì)胞銀行(ATCC)液氮凍存有3200個已經(jīng)過鑒定的細(xì)胞系(1992)，其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細(xì)胞系和來自不同物種的近75個雜交瘤細(xì)胞株。

二、胚胎冷凍保存技術(shù)

胚胎冷凍保存技術(shù)是指在低溫條件下利用低溫保護(hù)劑保存胚胎的一門技術(shù)。這一技術(shù)是20世紀(jì)后半葉隨著人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用而產(chǎn)生的，目前已成為了現(xiàn)代生命科學(xué)研究必備的手段之一。動物胚胎的冷凍保存原理就是因?yàn)榈蜏亟档土伺咛?nèi)的變質(zhì)反應(yīng)速度，細(xì)胞保存的溫度越低，細(xì)胞及生物樣品的保存時間就越長。

目前已經(jīng)有很多種生物制品細(xì)胞胚胎等的冷凍保存深冷保存方法，包括慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植深冷法和玻璃冷凍，超級冷凍法都可以快速冷凍

①將胚胎在室溫下放人25％玻璃化溶液(VS液)中預(yù)處理15min；

②將預(yù)處理后的胚胎放在高濃度(75％一90％)的VS液中保存20—40min；

③將經(jīng)過兩步抗凍劑處理的胚胎直接投入液氮中保存。

此外還可以用液氮罐保存菌種、疫苗、骨組織、精子等物質(zhì)，均可達(dá)到很好的長期存儲的效果